p19 INK4D/CDKN2D CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419613

Übersicht

Das murine Gen **Cdkn2d** kodiert **p19^INK4D** (CDKN2D), einen Inhibitor cyclinabhängiger Kinasen, der das Fortschreiten des Zellzyklus bremst, indem er an **CDK4/6** bindet und die cyclin‑D‑abhängige Phosphorylierung von **RB** begrenzt und damit den **G1‑Checkpoint** durchsetzt. p19^INK4D integriert Signale aus mitogenen und stressresponsiven Signalwegen, um Proliferation mit Differenzierung zu koordinieren – insbesondere in sich entwickelnden und adulten Geweben, in denen eine präzise Kontrolle des Zellzyklus erforderlich ist. Eine veränderte Regulation der **INK4‑Familie** und der **RB–E2F‑Achse** ist breit mit entgleister Proliferation und genomischer Instabilität verknüpft, wodurch CDKN2D einen nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung der Zellzykluskontrolle in krankheitsrelevanten Kontexten darstellt. Störungen von **Cdkn2d** werden zudem genutzt, um kompensatorische Beziehungen zwischen INK4‑Proteinen und deren Einfluss auf seneszenzähnliche Programme und Linienfestlegung zu untersuchen.

Das p19 INK4D/CDKN2D CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Cdkn2d-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Cdkn2d-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Cdkn2d nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die p19 INK4D/CDKN2D-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Cdkn2d-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der p19 INK4D/CDKN2D-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Cdkn2d-Exone abzielen, die für die p19 INK4D/CDKN2D-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Cdkn2d-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom p19 INK4D/CDKN2D CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom p19 INK4D/CDKN2D CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Cdkn2d-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das p19 INK4D/CDKN2D HDR-Plasmid (m) und p19 INK4D/CDKN2D HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Cdkn2d-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Cdkn2d-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.