Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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p130 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422615
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- p130 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico p130, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: p130 Anticuerpo (A-10): sc-374521
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
p130 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422615 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El gen murino Rbl2 codifica la proteína similar al retinoblastoma p130 (RBL2), una proteína de tipo “pocket” que se asocia con E2F4/5 y con los complejos DREAM para reprimir la transcripción y favorecer la salida del ciclo celular. p130 integra señales de la actividad CDK-ciclina y de la remodelación dependiente de fosforilación de los complejos de la familia RB para regular la transición G0/G1, la quiescencia y los programas de diferenciación. A través de estas vías, Rbl2 influye en el control de los puntos de control, la represión asociada a la cromatina y la estabilidad de linaje, por lo que es relevante para estudios del control de la proliferación y de la desregulación oncogénica. La función alterada de la vía de RB que perturba la represión de E2F mediada por p130 se examina con frecuencia en modelos de cáncer, senescencia y homeostasis tisular.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO p130 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Rbl2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Rbl2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Rbl2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína p130.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Rbl2 para la investigación de la señalización de p130, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Rbl2 críticos para la función de p130
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Rbl2 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido p130 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido p130 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Rbl2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR p130 (m) y el plásmido HDR p130 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Rbl2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Rbl2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.