Orexin-A/B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420816

Panoramica

Il gene Hcrt del topo codifica i neuropeptidi orexina-A e orexina-B (ipocretine), prodotti da una popolazione ristretta di neuroni ipotalamici e che segnalano principalmente attraverso i recettori accoppiati a proteine G (GPCR) OX1R e OX2R. La segnalazione dell’orexina promuove l’arousal e il mantenimento della veglia, integra il bilancio energetico con il comportamento alimentare e modula le risposte di ricompensa e stress tramite l’accoppiamento alla mobilizzazione intracellulare di Ca2+, alla segnalazione MAPK e a circuiti neuroendocrini più ampi. Questi peptidi influenzano l’output autonomico e le transizioni sonno–veglia modellando la spinta eccitatoria lungo vie monoaminergiche e colinergiche. Una funzione dell’orexina deregolata è fortemente associata a instabilità sonno–veglia e a fenotipi metabolici, rendendo Hcrt un nodo chiave per studi meccanicistici sul controllo degli stati neurali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Orexin-A/B (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Hcrt in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Hcrt insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Hcrt a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Orexin-A/B.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Hcrt per lo studio della segnalazione di Orexin-A/B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Hcrt critici per la funzione di Orexin-A/B
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Hcrt per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Orexin-A/B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Orexin-A/B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Hcrt. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Orexin-A/B Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Orexin-A/B (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Hcrt per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Hcrt definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.