NTE Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406850

Panoramica

PNPLA6 codifica la neuropathy target esterase (NTE), una fosfolipasi/lisofosfolipasi associata alla membrana che idrolizza la fosfatidilcolina per regolare l’omeostasi dei fosfolipidi. L’attività di NTE sostiene l’integrità della membrana del reticolo endoplasmatico, la dinamica delle goccioline lipidiche e il mantenimento dei neuroni controllando i livelli di lisofosfolipidi bioattivi. L’alterazione di PNPLA6 compromette il rimodellamento delle membrane e le vie di segnalazione lipidica, processi strettamente legati alla stabilità degli assoni e alla funzione sinaptica. Le varianti genetiche in PNPLA6 sono associate a fenotipi neurodegenerativi e neurosviluppo, rendendolo un locus utile per studiare i meccanismi, guidati dai lipidi, alla base della vulnerabilità neuronale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NTE (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PNPLA6 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PNPLA6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PNPLA6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NTE.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PNPLA6 per lo studio della segnalazione di NTE, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PNPLA6 critici per la funzione di NTE
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PNPLA6 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal NTE CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal NTE CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PNPLA6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal NTE Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR NTE (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PNPLA6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PNPLA6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.