Plasmide CRISPR/Cas9 KO NOD1 (m): sc-430738

Présentation

Le gène murin *Nod1* code NOD1, un récepteur cytosolique de type NOD (NOD-like receptor) qui détecte des motifs spécifiques de peptidoglycane contenant de l’acide diaminopimélique provenant de bactéries Gram négatives et déclenche une signalisation de l’immunité innée. Après reconnaissance du ligand, NOD1 recrute RIPK2 afin d’activer les voies NF-κB et MAPK, favorisant l’expression de gènes inflammatoires, des réponses antimicrobiennes, ainsi que des interactions avec l’autophagie et les programmes de barrière épithéliale. L’activité de NOD1 façonne les interactions hôte–microbiote et influence la production de cytokines, ce qui en fait une cible pertinente dans des modèles expérimentaux d’inflammation des muqueuses, de biologie des infections et de lésions tissulaires médiées par l’immunité. Une signalisation NOD1 dérégulée a été impliquée dans la physiopathologie inflammatoire et l’inflammation métabolique, ce qui soutient son utilisation comme nœud génétique pour interroger les circuits de l’immunité innée.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NOD1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Nod1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Nod1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Nod1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NOD1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Nod1 pour l'étude de la signalisation de NOD1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Nod1 essentiels à la fonction de NOD1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Nod1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le NOD1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le NOD1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Nod1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le NOD1 plasmide HDR (m) et le NOD1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Nod1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Nod1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.