Plasmide CRISPR/Cas9 KO NMD3 (h): sc-406373

Présentation

NMD3 code un facteur essentiel de biogenèse des ribosomes qui agit comme adaptateur pour l’export des sous-unités ribosomiques pré-60S du noyau vers le cytoplasme. En coordination avec la voie d’export CRM1/XPO1 et les événements de remodelage lors des étapes tardives de la maturation de la 60S, NMD3 contribue à assurer l’assemblage efficace de ribosomes compétents pour la traduction et le maintien de la protéostasie. La perturbation de l’export des ribosomes dépendant de NMD3 peut déclencher des réponses de stress nucléolaire et modifier la progression du cycle cellulaire via des effets en aval sur la traduction globale. Étant donné que la biogenèse des ribosomes est étroitement liée au contrôle de la croissance, une régulation aberrante de ce processus est pertinente pour l’étude des mécanismes de maladies prolifératives et associées au stress, notamment les ribosomopathies et la reprogrammation de la traduction associée au cancer.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NMD3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène NMD3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du NMD3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert NMD3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NMD3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en NMD3 pour l'étude de la signalisation de NMD3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de NMD3 essentiels à la fonction de NMD3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de NMD3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le NMD3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le NMD3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus NMD3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le NMD3 plasmide HDR (h) et le NMD3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie NMD3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles NMD3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.