NEIL1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403778

Übersicht

NEIL1 (endonuclease VIII-like 1) ist eine DNA-Glykosylase/AP-Lyase, die die Basenexzisionsreparatur (BER) einleitet, indem sie oxidierte DNA-Läsionen, einschließlich geschädigter Pyrimidine, erkennt und entfernt sowie abasische Stellen verarbeitet, um einen Strangschnitt zu fördern. Es wirkt in Signalwegen der oxidativen Stressantwort und der Genomerhaltung und koordiniert mit nachgeschalteten BER-Enzymen die Wiederherstellung der DNA-Integrität während Replikation und Transkription. Die NEIL1-Aktivität beeinflusst die Anhäufung von Mutationen und die chromosomale Stabilität und verknüpft ihre Fehlregulation mit Mechanismen, die der Karzinogenese und anderen Erkrankungen zugrunde liegen, die mit oxidativen DNA-Schäden assoziiert sind. Als nukleärer Reparaturfaktor wird NEIL1 häufig im Kontext der replikationsgekoppelten Reparatur, der Stabilität des mitochondrialen und nukleären Genoms sowie zellulärer Antworten auf reaktive Sauerstoffspezies untersucht.

Das NEIL1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des NEIL1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des NEIL1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von NEIL1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die NEIL1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von NEIL1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der NEIL1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf NEIL1-Exone abzielen, die für die NEIL1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere NEIL1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom NEIL1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom NEIL1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des NEIL1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das NEIL1 HDR-Plasmid (h) und NEIL1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von NEIL1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten NEIL1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.