NDUFS3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-427031

Panoramica

Ndufs3 codifica NDUFS3, una subunità essenziale del complesso I della catena respiratoria mitocondriale (NADH:ubichinone ossidoreduttasi) codificata dal nucleo, che supporta il trasferimento di elettroni dall’NADH all’ubichinone e contribuisce al pompaggio di protoni attraverso la membrana mitocondriale interna. La corretta funzione di NDUFS3 è necessaria per un’efficiente fosforilazione ossidativa, per il mantenimento del potenziale di membrana mitocondriale e per la regolazione dell’equilibrio redox cellulare. L’alterazione dei componenti del complesso I può compromettere la produzione di ATP e aumentare le specie reattive dell’ossigeno, influenzando il rimodellamento metabolico e la segnalazione da stress. Nei modelli murini, la perturbazione di Ndufs3 è rilevante per lo studio dei meccanismi di disfunzione mitocondriale implicati in fenotipi neuromuscolari, cardiaci e associati a neurodegenerazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NDUFS3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ndufs3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ndufs3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ndufs3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NDUFS3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ndufs3 per lo studio della segnalazione di NDUFS3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ndufs3 critici per la funzione di NDUFS3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ndufs3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal NDUFS3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal NDUFS3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ndufs3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal NDUFS3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR NDUFS3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ndufs3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ndufs3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.