Plasmide CRISPR/Cas9 KO Myosin XVIIIa (m): sc-436163

Présentation

Myo18a code la myosine XVIIIa, un moteur/échafaudage non conventionnel dépendant de l’actine, qui se localise au niveau de réseaux d’actine dynamiques et contribue à l’organisation du cytosquelette, au remodelage membranaire et au contrôle de la forme cellulaire. La myosine XVIIIa a été associée à des processus tels que la migration cellulaire, l’adhérence et le trafic intracellulaire, via la coordination de l’assemblage des filaments d’actine et des structures contractiles. Dans les modèles murins, la fonction de Myo18a est fréquemment étudiée dans le contexte de la morphogenèse tissulaire, de la motilité des cellules neuronales et immunitaires, ainsi que de la régulation des voies de mécanotransduction. Une architecture actine–myosine dérégulée et la signalisation associée peuvent influencer des phénotypes pertinents pour des anomalies du développement et des altérations liées au cancer, notamment en matière d’invasion et de métastases.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Myosin XVIIIa (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Myo18a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Myo18a, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Myo18a à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Myosin XVIIIa.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Myo18a pour l'étude de la signalisation de Myosin XVIIIa, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Myo18a essentiels à la fonction de Myosin XVIIIa
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Myo18a pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Myosin XVIIIa plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Myosin XVIIIa plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Myo18a. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Myosin XVIIIa plasmide HDR (m) et le Myosin XVIIIa (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Myo18a pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Myo18a définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.