Mx1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400977

Übersicht

MX1 kodiert das Myxovirus-Resistenzprotein 1 (Mx1), eine dynaminähnliche, durch Interferon induzierte GTPase, die die intrinsische antivirale Abwehr vermittelt, indem sie die Replikation verschiedener RNA-Viren einschränkt. Mx1 wird nachgeschaltet der Typ-I- und Typ-III-Interferon-Signalübertragung über den JAK-STAT-Signalweg induziert und ist in umfassendere Programme der angeborenen Immunität eingebunden, die durch ISGF3-gesteuerte Transkription reguliert werden. Durch die Beeinflussung des Transports viraler Nukleokapside und der Integrität von Replikationskomplexen trägt Mx1 zu zellulären Stressantworten bei, die die Zytokinproduktion und die zellintrinsische Resistenz von Immunzellen mitprägen. Eine dysregulierte MX1-Expression wird häufig als molekularer Readout für die Aktivierung des Interferon-Signalwegs verwendet und ist relevant für Studien zur Virussuszeptibilität, zu chronisch-entzündlichen Zuständen sowie zu Tumormikroumgebungen mit erhöhten Interferon-Signaturen.

Das Mx1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MX1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MX1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MX1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Mx1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MX1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Mx1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MX1-Exone abzielen, die für die Mx1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MX1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Mx1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Mx1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MX1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Mx1 HDR-Plasmid (h) und Mx1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MX1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MX1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.