Mx1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400977

Panoramica

MX1 codifica la proteina 1 di resistenza ai mixovirus (Mx1), una GTPasi stimolata dall’interferone, simile alla dynamina, che media la difesa antivirale intrinseca limitando la replicazione di diversi virus a RNA. Mx1 viene indotta a valle della segnalazione degli interferoni di tipo I e di tipo III attraverso la via JAK–STAT e si integra in programmi più ampi dell’immunità innata regolati dalla trascrizione guidata da ISGF3. Modulando il traffico del nucleocapside virale e l’integrità dei complessi di replicazione, Mx1 contribuisce a risposte cellulari allo stress che plasmano la produzione di citochine e la resistenza intrinseca delle cellule immunitarie. L’espressione disregolata di MX1 è ampiamente utilizzata come readout molecolare dell’attivazione della via dell’interferone ed è rilevante negli studi sulla suscettibilità virale, sugli stati infiammatori cronici e sui microambienti tumorali caratterizzati da firme di interferone elevate.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Mx1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MX1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MX1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MX1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Mx1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MX1 per lo studio della segnalazione di Mx1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MX1 critici per la funzione di Mx1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MX1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Mx1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Mx1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MX1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Mx1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Mx1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MX1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MX1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.