musculin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403242

Übersicht

MSC kodiert Musculin, einen basischen Helix-Loop-Helix-(bHLH)-Transkriptionsfaktor, der durch Bindung an E-Box-Motive und durch Kooperation mit anderen bHLH-Regulatoren lineagespezifische Genexpressionsprogramme moduliert. Musculin spielt nachweislich eine Rolle bei der Steuerung von Zellschicksalsentscheidungen, dem Timing der Differenzierung sowie der Dynamik von Transkriptionsrepression und -aktivierung in entwicklungs- und gewebespezifischen Kontexten, mit nachgelagerten Effekten auf Proliferation und phänotypische Stabilität. Eine veränderte MSC-Expression wurde in mehreren krankheitsrelevanten Situationen beschrieben, darunter krebsassoziierte transkriptionelle Reprogrammierung und Veränderungen des Differenzierungszustands, was MSC zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung genregulatorischer Netzwerke macht. Die funktionelle Analyse von Musculin trägt dazu bei zu klären, wie bHLH-gesteuerte Schaltkreise mit Signalwegen zusammenwirken, die Wachstumskontrolle und zelluläre Identität regulieren.

Das musculin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MSC-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MSC-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MSC nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die musculin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MSC-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der musculin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MSC-Exone abzielen, die für die musculin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MSC-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom musculin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom musculin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MSC-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das musculin HDR-Plasmid (h) und musculin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MSC-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MSC-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.