Plasmide CRISPR/Cas9 KO Mucin 6/MUC6 (h): sc-402946

Présentation

MUC6 code pour la mucine 6, une mucine sécrétée, fortement O‑glycosylée et formant un gel, qui contribue à la barrière protectrice de mucus à la surface des épithéliums. Grâce à l’étendue de ses structures glycanes et à la formation d’une matrice polymérique, MUC6 aide à réguler l’hydratation, la viscosité et les interactions avec les microbes et les facteurs luminales, contribuant ainsi à l’homéostasie des muqueuses et à la défense innée. Son expression est liée à la différenciation épithéliale et aux programmes de biosynthèse des mucines, en interface avec les voies de glycosylation du RE/Golgi et les processus de maintien de la barrière. Une expression dérégulée de MUC6 et des profils de glycosylation des mucines modifiés sont associés à des lésions inflammatoires et au remodelage épithélial dans les maladies gastro‑intestinales et d’autres affections des muqueuses, et MUC6 est fréquemment évaluée comme biomarqueur de lignée et d’état des cellules muqueuses en biologie du cancer.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Mucin 6/MUC6 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MUC6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MUC6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MUC6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Mucin 6/MUC6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MUC6 pour l'étude de la signalisation de Mucin 6/MUC6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MUC6 essentiels à la fonction de Mucin 6/MUC6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MUC6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Mucin 6/MUC6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Mucin 6/MUC6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MUC6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Mucin 6/MUC6 plasmide HDR (h) et le Mucin 6/MUC6 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MUC6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MUC6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.