MMS19 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405964

Übersicht

MMS19 kodiert MMS19, einen konservierten Faktor, der an der Aufrechterhaltung des Genoms beteiligt ist – über seine Funktionen in der zytosolischen Assemblierung von Eisen‑Schwefel-(Fe‑S)-Clustern und der Reifung Fe‑S‑abhängiger nukleärer Proteine, die an DNA-Replikation und -Reparatur mitwirken. Durch die Unterstützung der funktionellen Integrität mehrerer Enzyme des DNA-Stoffwechsels trägt MMS19 zur Toleranz gegenüber Replikationsstress, zur Signalweiterleitung der DNA-Schadensantwort und zur allgemeinen chromosomalen Stabilität bei. Eine Störung von MMS19 ist daher für Signalwege relevant, die die Genomintegrität schützen, und kann die zelluläre Empfindlichkeit gegenüber genotoxischen Stressoren beeinflussen. Fehlregulierte, MMS19-assoziierte Prozesse sind von Interesse für Studien zur Mutationsakkumulation, zur Checkpoint-Kontrolle und zu Mechanismen, die Genominstabilitäts-Phänotypen in krankheitsassoziierten Kontexten zugrunde liegen.

Das MMS19 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MMS19-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MMS19-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MMS19 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die MMS19-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MMS19-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der MMS19-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MMS19-Exone abzielen, die für die MMS19-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MMS19-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom MMS19 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom MMS19 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MMS19-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das MMS19 HDR-Plasmid (h) und MMS19 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MMS19-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MMS19-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.