MKP-6 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406250

Panoramica

La fosfatasi proteica a doppia specificità 14 (DUSP14), nota anche come MKP-6, è una fosfatasi citoplasmatica delle MAPK che defosforila residui di treonina e tirosina per attenuare la segnalazione delle MAPK. Modula principalmente vie sensibili allo stress e alle citochine, incluse le cascate JNK e p38 MAPK, plasmando programmi trascrizionali a valle che controllano proliferazione, apoptosi e risposte infiammatorie. Grazie al suo ruolo di regolatore a feedback negativo dell’attività delle MAPK, DUSP14 contribuisce a calibrare ampiezza e durata del segnale in contesti immunitari ed epiteliali. Un’espressione o un’attività deregolata di DUSP14 è stata associata ad alterazioni dell’omeostasi della segnalazione osservate nella biologia del cancro e nei meccanismi delle malattie immuno-mediate, a supporto del suo impiego come nodo per studi incentrati sulle vie di segnalazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MKP-6 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DUSP14 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DUSP14 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DUSP14 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MKP-6.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DUSP14 per lo studio della segnalazione di MKP-6, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni DUSP14 critici per la funzione di MKP-6
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DUSP14 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MKP-6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MKP-6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DUSP14. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MKP-6 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MKP-6 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DUSP14 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DUSP14 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.