Mitofilin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-429376

Übersicht

Mouse Immt kodiert Mitofilin, eine zentrale Komponente des MICOS-Komplexes (mitochondrial contact site and cristae organizing system), der die Architektur der inneren Mitochondrienmembran und die Bildung von Crista-Junctions aufrechterhält. Mitofilin stabilisiert die mitochondriale Ultrastruktur, koordiniert Kontakte zwischen innerer und äußerer Membran und beeinflusst den Proteinimport sowie die Organisation der Atmungskette, die für die oxidative Phosphorylierung wichtig sind. Eine Störung von IMMT beeinträchtigt die Crista-Morphologie, die mitochondriale Dynamik und die bioenergetische Homöostase – Prozesse, die breit mit Neurodegeneration, Kardiomyopathie, Stoffwechselstörungen und der Anpassungsfähigkeit von Krebszellen in Verbindung gebracht werden. Als Knotenpunkt der Kopplung von mitochondrialer Struktur und Funktion wird Immt häufig in Signalwegen untersucht, die die Apoptose-Empfindlichkeit, Mitophagie und zelluläre Stressantworten steuern.

Das Mitofilin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Immt-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Immt-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Immt nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Mitofilin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Immt-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Mitofilin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Immt-Exone abzielen, die für die Mitofilin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Immt-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Mitofilin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Mitofilin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Immt-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Mitofilin HDR-Plasmid (m) und Mitofilin HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Immt-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Immt-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.