Med30 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406399

概要

MED30は、配列特異的な転写因子をRNAポリメラーゼIIに結び付け、制御された転写開始とプロモーター依存的な遺伝子発現を可能にするメディエーター複合体の中核サブユニットをコードします。Med30はメディエーターの構造的完全性に寄与し、細胞周期の進行、分化、ストレス応答性シグナル伝達を制御する協調的な転写プログラムを支えます。メディエーターは複数のシグナル入力を統合するため、MED30の機能が乱れると、増殖制御や細胞恒常性に関与する転写ネットワークが変化し得ます。メディエーター機能の破綻は、疾患に関連する遺伝子発現状態としばしば結び付いており、そのためMED30はヒト細胞における転写回路の研究に有用な結節点となります。

Med30 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるMED30遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、MED30内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、MED30のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Med30タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Med30シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、MED30欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Med30の機能に不可欠なMED30エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、MED30ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Med30 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびMed30 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、MED30遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Med30 HDRプラスミド（h）および Med30 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMED30ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMED30標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。