Med30 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406399

Übersicht

MED30 kodiert eine zentrale Untereinheit des Mediator-Komplexes, der sequenzspezifische Transkriptionsfaktoren mit der RNA-Polymerase II koppelt und so eine regulierte Initiation der Transkription sowie promotorabhängige Genexpression ermöglicht. Med30 trägt zur strukturellen Integrität des Mediators bei und unterstützt koordinierte Transkriptionsprogramme, die den Zellzyklusfortschritt, die Differenzierung und stressresponsive Signalwege steuern. Da der Mediator multiple Signaleingänge integriert, können Störungen von MED30 Transkriptionsnetzwerke verändern, die an der Kontrolle der Proliferation und der zellulären Homöostase beteiligt sind. Eine dysregulierte Mediator-Funktion ist häufig mit krankheitsrelevanten Genexpressionszuständen assoziiert, wodurch MED30 ein nützlicher Knotenpunkt für die Untersuchung transkriptioneller Schaltkreise in menschlichen Zellen ist.

Das Med30 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MED30-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MED30-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MED30 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Med30-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MED30-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Med30-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MED30-Exone abzielen, die für die Med30-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MED30-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Med30 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Med30 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MED30-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Med30 HDR-Plasmid (h) und Med30 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MED30-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MED30-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.