Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
MCM5 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401980
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- MCM5 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico MCM5, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: MCM5 Anticuerpo (E-10): sc-165994
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
MCM5 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-401980 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
MCM5 codifica una subunidad central de la helicasa MCM2–7, que licencia los orígenes de replicación e impulsa el desenrollamiento del ADN durante la fase S como parte de los complejos de pre-replicación y CMG (CDC45–MCM–GINS). Al coordinar el disparo de los orígenes y la progresión de la horquilla de replicación, MCM5 contribuye a la estabilidad del genoma y se relaciona con las vías de respuesta al daño del ADN y de puntos de control que restringen la síntesis aberrante de ADN. La expresión o actividad desregulada de proteínas de la familia MCM se asocia con frecuencia a una mayor capacidad proliferativa y a firmas de estrés replicativo observadas en múltiples contextos tumorales, lo que respalda su uso como marcador mecanístico en estudios del ciclo celular y del mantenimiento del genoma.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO MCM5 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen MCM5 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del MCM5 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de MCM5 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína MCM5.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en MCM5 para la investigación de la señalización de MCM5, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de MCM5 críticos para la función de MCM5
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de MCM5 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido MCM5 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido MCM5 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus MCM5. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR MCM5 (h) y el plásmido HDR MCM5 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología MCM5 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana MCM5 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.