MACF1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-418945

Panoramica

Macf1 codifica il fattore 1 di crosslinking microtubuli–actina (MACF1), una grande spectraplakina che collega meccanicamente e funzionalmente i microtubuli con il citoscheletro di actina per coordinare la polarità cellulare, la migrazione e il trasporto intracellulare. Nelle cellule di topo, MACF1 sostiene il turnover delle adesioni focali e il rimodellamento del citoscheletro ed è stato collegato alla segnalazione Wnt/β-catenina attraverso la regolazione della dinamica del complesso di Axin, influenzando gli output di segnalazione dipendenti dal citoscheletro. Integrando le reti di actina e microtubuli, MACF1 contribuisce allo sviluppo neuronale, all’organizzazione dei tessuti epidermico e intestinale e alle risposte a stimoli/meccanocues. La disregolazione dei programmi citoscheletrici associati a MACF1 è stata studiata in contesti quali fenotipi neuro-sviluppativi, integrità della barriera e comportamenti migratori simil-metastatici rilevanti per modelli di biologia del cancro.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MACF1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Macf1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Macf1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Macf1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MACF1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Macf1 per lo studio della segnalazione di MACF1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Macf1 critici per la funzione di MACF1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Macf1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MACF1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal MACF1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Macf1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MACF1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR MACF1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Macf1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Macf1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.