Lunatic Fringe Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421414

Panoramica

Lfng codifica Lunatic Fringe, una β1,3-N-acetilglucosaminiltransferasi localizzata nel Golgi che modifica le ripetizioni tipo fattore di crescita epidermico (EGF-like) O-fucosilate sui recettori NOTCH. Alterando le interazioni tra recettore Notch e ligando, Lunatic Fringe regola finemente l’intensità del segnale Notch e la dinamica oscillatoria che governano la segmentazione dei somiti, la formazione dei confini e le decisioni di destino cellulare durante lo sviluppo del topo. L’attività di Lfng è collegata all’“orologio” della segmentazione e a programmi più ampi dipendenti da Notch che influenzano il mantenimento dei progenitori e la differenziazione in molteplici tessuti. Una modulazione deregolata di LFNG/Notch è rilevante per difetti di patterning dello sviluppo e offre un punto di accesso meccanicistico per studiare, in sistemi modello, il contributo della via di Notch a fenotipi associati a malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Lunatic Fringe (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Lfng in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Lfng insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Lfng a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Lunatic Fringe.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Lfng per lo studio della segnalazione di Lunatic Fringe, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Lfng critici per la funzione di Lunatic Fringe
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Lfng per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Lunatic Fringe CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Lunatic Fringe CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Lfng. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Lunatic Fringe Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Lunatic Fringe (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Lfng per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Lfng definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.