LDH-A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (r): sc-437361

Panoramica

La lattato deidrogenasi A (LDH-A) catalizza l’interconversione tra piruvato e lattato con il concomitante ciclo NADH/NAD⁺, una reazione chiave che sostiene la glicolisi anaerobia e l’omeostasi redox. Nelle cellule di ratto, LDH-A contribuisce a mantenere il flusso glicolitico in condizioni di ipossia e di alta richiesta energetica, influenzando la produzione di lattato, l’equilibrio del pH citosolico e il dialogo metabolico con il ciclo dell’acido citrico (TCA). L’attività di LDH-A è strettamente associata ai programmi di riprogrammazione metabolica che accompagnano la proliferazione e l’adattamento allo stress, incluse le risposte regolate da HIF-1 e le variazioni nella disponibilità di NAD⁺. Un metabolismo del lattato dipendente da LDH-A deregolato è stato associato a contesti patologici quali danno ischemico, infiammazione e fenotipi metabolici di tipo tumorale, rendendola un bersaglio utile per studi meccanicistici della segnalazione metabolica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO LDH-A (r) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene in linee cellulari rat. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina LDH-A.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di per lo studio della segnalazione di LDH-A, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni critici per la funzione di LDH-A
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal LDH-A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (r) e dal LDH-A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (r2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus . Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal LDH-A Plasmide HDR (r) e il plasmide HDR LDH-A (r2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.