LAP2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403613

Panoramica

TMPO codifica per la lamina-associated polypeptide 2 (LAP2), una proteina della membrana nucleare interna che si lega alle lamine e alla cromatina per organizzare la lamina nucleare e mantenere l’architettura dell’involucro nucleare. Le isoforme di LAP2 contribuiscono all’ancoraggio dell’eterocromatina periferica, alla regolazione della tempistica di replicazione del DNA e al coordinamento della riassemblazione nucleare post-mitotica, collegando TMPO ai pathway di controllo del ciclo cellulare e di stabilità del genoma. Attraverso interazioni con la lamina A/C e altri componenti dell’involucro, LAP2 influenza la meccanotrasduzione e l’integrità nucleare in condizioni di proliferazione o di stress. Un’alterata espressione di TMPO/LAP2 o una disfunzione dell’involucro nucleare è associata a un’anomala morfologia nucleare osservata nel cancro e in altri disturbi che comportano un’organizzazione del genoma compromessa.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO LAP2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TMPO in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TMPO insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TMPO a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina LAP2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TMPO per lo studio della segnalazione di LAP2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TMPO critici per la funzione di LAP2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TMPO per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal LAP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal LAP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TMPO. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal LAP2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR LAP2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TMPO per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TMPO definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.