Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
karyopherin β2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403099
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- karyopherin β2 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico karyopherin β2, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: karyopherin β2 Antibody (F-6): sc-166127
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
karyopherin β2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-403099 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
TNPO1 codifica la carioferina β2 (transportina-1), un recettore di importazione regolato da RanGTP che riconosce segnali di localizzazione nucleare di tipo PY e media l’importazione nucleare selettiva di proteine leganti l’RNA e di altri carichi attraverso il complesso del poro nucleare. Regolando il trasporto nucleo‑citoplasmatico, la carioferina β2 influenza il metabolismo dell’RNA, la dinamica dei granuli da stress e la regolazione trascrizionale, ed è collegata a vie come il ciclo di Ran e la macchina di trasporto del poro nucleare. Un traffico dipendente dalla transportina deregolato è stato implicato in meccanismi rilevanti per la mislocalizzazione e l’aggregazione proteica, nonché per programmi di espressione genica alterati, offrendo un punto d’ingresso funzionale per studiare difetti di trasporto in stati cellulari associati a malattia.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO karyopherin β2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TNPO1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TNPO1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TNPO1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina karyopherin β2.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TNPO1 per lo studio della segnalazione di karyopherin β2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni TNPO1 critici per la funzione di karyopherin β2
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TNPO1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal karyopherin β2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal karyopherin β2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TNPO1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal karyopherin β2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR karyopherin β2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TNPO1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TNPO1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.