IL-5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421112

Übersicht

Il5 kodiert Interleukin‑5 (IL‑5), ein Th2‑assoziiertes Zytokin, das die Festlegung der Eosinophilen-Linie, ihr Überleben und ihre Aktivierung koordiniert und bei Mäusen die Proliferation von B‑Zellen sowie den Klassenwechsel unterstützt. IL‑5 signalisiert über den IL‑5‑Rezeptor (IL5RA zusammen mit der gemeinsamen β‑Kette) und aktiviert dabei JAK/STAT‑, MAPK‑ und PI3K‑Signalwege, wodurch Typ‑2‑Immunprogramme und die Rekrutierung von Granulozyten geprägt werden. Eine fehlregulierte IL‑5‑Aktivität ist mit eosinophilengetriebener Entzündung und allergischen Atemwegsreaktionen verknüpft, was Il5 zu einem zentralen Knotenpunkt für die Analyse von Zytokinnetzwerken macht, die die mukosale Immunität steuern. In experimentellen Modellen wird die gezielte Veränderung von Il5 eingesetzt, um die Differenzierung von Leukozyten, chemotaktische Schaltkreise und den Zytokin‑Cross‑Talk während Helminthenreaktionen und allergischer Entzündung zu untersuchen.

Das IL-5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Il5-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Il5-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Il5 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die IL-5-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Il5-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der IL-5-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Il5-Exone abzielen, die für die IL-5-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Il5-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom IL-5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom IL-5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Il5-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das IL-5 HDR-Plasmid (m) und IL-5 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Il5-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Il5-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.