Plasmide CRISPR/Cas9 KO IL-31 (h): sc-410448

Présentation

L’IL31 humain code l’interleukine 31 (IL‑31), une cytokine dérivée des lymphocytes T qui transmet son signal via un complexe récepteur hétérodimérique (IL31RA et OSMR) afin d’activer les voies JAK/STAT, MAPK/ERK et PI3K/AKT. L’IL‑31 module les réponses des cellules épithéliales et stromales, en influençant la production de chimiokines, l’inflammation de la barrière et la communication neuro‑immune qui contribue au prurit et au remodelage tissulaire. Une dérégulation de la signalisation de l’IL‑31 a été associée aux maladies inflammatoires de la peau et à l’inflammation allergique des voies aériennes, et elle est étudiée comme médiateur reliant l’immunité de type 2 au prurit et aux circuits inflammatoires chroniques. Ces propriétés font d’IL31 une cible pertinente pour des études mécanistiques de la signalisation induite par les cytokines, des interactions entre récepteurs (cross‑talk) et des interactions immuno‑épithéliales.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO IL-31 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène IL31 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du IL31, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert IL31 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine IL-31.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en IL31 pour l'étude de la signalisation de IL-31, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de IL31 essentiels à la fonction de IL-31
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de IL31 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le IL-31 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le IL-31 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus IL31. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le IL-31 plasmide HDR (h) et le IL-31 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie IL31 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles IL31 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.