IL-1F9 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406176

Panoramica

IL36G codifica l’interleuchina-36 gamma (IL-1F9), una citochina della famiglia dell’IL-1 che agisce come alarmina di origine epiteliale e mieloide, amplificando le risposte immunitarie innate e adattative. Dopo l’attivazione proteolitica, IL-1F9 segnala attraverso il complesso recettoriale dell’IL-36 (IL1RL2/IL1RAP) per innescare le vie di NF-κB e MAPK, inducendo l’espressione di chemochine e mediatori infiammatori che reclutano e attivano i leucociti. Questo asse contribuisce all’immunità di barriera nella cute e sulle superfici mucosali e modella l’infiammazione associata a Th17 tramite crosstalk con i programmi IL-17/IL-23. Un’attività disregolata di IL36G è stata implicata in patologie infiammatorie cutanee come la psoriasi e, più in generale, in contesti di infiammazione tissutale cronica, rendendolo un nodo utile per studiare l’amplificazione delle reti citochiniche e la segnalazione immunitaria epiteliale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO IL-1F9 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene IL36G in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del IL36G insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto IL36G a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina IL-1F9.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di IL36G per lo studio della segnalazione di IL-1F9, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni IL36G critici per la funzione di IL-1F9
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di IL36G per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal IL-1F9 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal IL-1F9 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus IL36G. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal IL-1F9 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR IL-1F9 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia IL36G per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio IL36G definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.