Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
IGFBP1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421061
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- IGFBP1 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico IGFBP1, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: IGFBP1 Antibody (H-5): sc-55474
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
IGFBP1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-421061 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Igfbp1 codifica la proteina 1 legante l’IGF (insulin-like growth factor binding protein 1, IGFBP1), un regolatore secreto che si lega a IGF-I e IGF-II per modularne la biodisponibilità, l’interazione con i recettori e la segnalazione a valle. Plasmando l’attività dell’asse IGF, IGFBP1 influenza gli output delle vie PI3K–AKT e MAPK che governano l’omeostasi metabolica, la sopravvivenza cellulare e la proliferazione. Nella fisiologia del topo, l’espressione epatica di Igfbp1 è fortemente sensibile a segnali nutrizionali e ormonali, collegando la segnalazione insulinica, i programmi gluconeogenici e la dinamica sistemica dei fattori di crescita. Livelli alterati di IGFBP1 sono stati associati a stati di stress metabolico e a contesti di segnalazione IGF modificati, rilevanti per la funzione epatica e per fenotipi correlati all’infiammazione.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO IGFBP1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Igfbp1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Igfbp1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Igfbp1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina IGFBP1.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Igfbp1 per lo studio della segnalazione di IGFBP1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Igfbp1 critici per la funzione di IGFBP1
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Igfbp1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal IGFBP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal IGFBP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Igfbp1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal IGFBP1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR IGFBP1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Igfbp1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Igfbp1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.