HSPA8/HSC70 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-418508

Descripción general

HSPA8 (HSC70) es una chaperona molecular de la familia HSP70 expresada de manera constitutiva que mantiene la proteostasis al promover, de forma dependiente de ATP, el plegamiento, repliegamiento y la selección/derivación (triaje) de proteínas nacientes o dañadas por el estrés. Participa en vías de control de calidad proteica, incluida la autofagia mediada por chaperonas a través de LAMP2A lisosomal, la endocitosis y el desensamblaje de clatrina, y la regulación de la dinámica de los gránulos de estrés, influyendo así en las respuestas celulares al estrés proteotóxico y metabólico. Mediante interacciones con co-chaperonas y el sistema ubiquitina–proteasoma, HSPA8 contribuye a gobernar el recambio proteico, la homeostasis de orgánulos y la robustez de la señalización en diversos tipos celulares. La desregulación de redes de chaperonas vinculadas a HSPA8 se ha asociado con la biología de la agregación proteica y con programas alterados de adaptación al estrés observados en contextos de investigación sobre neurodegeneración y cáncer.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO HSPA8/HSC70 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen HSPA8 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del HSPA8 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de HSPA8 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína HSPA8/HSC70.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en HSPA8 para la investigación de la señalización de HSPA8/HSC70, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de HSPA8 críticos para la función de HSPA8/HSC70
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de HSPA8 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido HSPA8/HSC70 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido HSPA8/HSC70 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus HSPA8. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR HSPA8/HSC70 (h) y el plásmido HDR HSPA8/HSC70 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología HSPA8 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana HSPA8 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.