Plasmide CRISPR/Cas9 KO hippocalcin (m): sc-420938

Présentation

Hpca code l’hippocalcine, une protéine neuronale liant le calcium de type EF-hand, appartenant à la famille des capteurs neuronaux de calcium, qui couple les transitoires de Ca2+ à des modifications de la signalisation synaptique et de l’excitabilité. Lors de la fixation du Ca2+, l’hippocalcine subit un changement conformationnel pouvant moduler son association à la membrane et influencer des processus tels que la plasticité synaptique, le trafic dépendant de l’activité et les programmes d’expression génique dans les neurones. Elle participe à des réseaux de signalisation dépendants du calcium qui croisent les voies des récepteurs aux neurotransmetteurs et des cascades de kinases/phosphatases en aval, façonnant la potentialisation et la dépression à long terme. Une homéostasie neuronale du Ca2+ dérégulée et une fonction altérée des capteurs de calcium sont pertinentes pour des études mécanistiques des phénotypes cognitifs et des dysfonctionnements des circuits associés à des maladies neurodégénératives ou neuropsychiatriques dans des modèles murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO hippocalcin (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Hpca dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Hpca, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Hpca à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine hippocalcin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Hpca pour l'étude de la signalisation de hippocalcin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Hpca essentiels à la fonction de hippocalcin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Hpca pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le hippocalcin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le hippocalcin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Hpca. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le hippocalcin plasmide HDR (m) et le hippocalcin (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Hpca pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Hpca définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.