Hippi Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-412438

Descripción general

IFT57 codifica un componente central del complejo B de transporte intraflagelar (IFT-B), que sostiene el transporte anterógrado de la carga necesaria para el ensamblaje y el mantenimiento del cilio primario. A través de su papel en la ciliogénesis, IFT57 contribuye a vías de transducción de señales dependientes del cilio, incluida la de Hedgehog y otros procesos mediados por receptores que coordinan el desarrollo, la progresión del ciclo celular y la homeostasis tisular. La alteración de la función de IFT-B se asocia con fenotipos vinculados a ciliopatías y se ha implicado en trastornos que afectan la biología esquelética, renal y retiniana, lo que convierte a IFT57 en un objetivo útil para estudios mecanísticos del transporte ciliar. En células humanas, la pérdida de IFT57 se utiliza comúnmente para investigar cómo una arquitectura ciliar deteriorada reconfigura las salidas de señalización y el tráfico dependiente de orgánulos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Hippi (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen IFT57 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del IFT57 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de IFT57 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Hippi.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en IFT57 para la investigación de la señalización de Hippi, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de IFT57 críticos para la función de Hippi
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de IFT57 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Hippi CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Hippi CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus IFT57. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Hippi (h) y el plásmido HDR Hippi (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología IFT57 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana IFT57 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.