Plasmide CRISPR/Cas9 KO HepaCAM (h): sc-406036

Présentation

HEPACAM code HepaCAM, une molécule d’adhérence cellulaire de type immunoglobuline, enrichie à la membrane plasmique, qui soutient les interactions cellule–cellule et l’organisation des tissus épithéliaux. HepaCAM contribue à l’inhibition de contact, à la modulation de la morphologie cellulaire et à la régulation de la dynamique du cytosquelette via des réseaux de signalisation associés à l’adhérence, qui influencent la migration et la prolifération. Une expression ou une fonction altérée de HEPACAM a été associée à une dérégulation du contrôle de la croissance et à un comportement invasif dans plusieurs contextes tumoraux, ce qui concorde avec des rôles dans le maintien d’états cellulaires différenciés. Ces propriétés font de HEPACAM un nœud utile pour étudier la signalisation dépendante de l’adhérence, la stabilité des jonctions et les phénotypes associés à la plasticité cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HepaCAM (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène HEPACAM dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du HEPACAM, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert HEPACAM à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HepaCAM.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en HEPACAM pour l'étude de la signalisation de HepaCAM, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de HEPACAM essentiels à la fonction de HepaCAM
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de HEPACAM pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le HepaCAM plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le HepaCAM plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus HEPACAM. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le HepaCAM plasmide HDR (h) et le HepaCAM (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie HEPACAM pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles HEPACAM définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.