HB-EGF Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400795

Panoramica

HBEGF codifica per l’heparin-binding EGF-like growth factor (HB-EGF), un ligando ancorato alla membrana che può essere rilasciato tramite shedding proteolitico per segnalare attraverso i recettori della famiglia EGFR/ERBB. HB-EGF attiva a valle le vie MAPK/ERK, PI3K–AKT e altri circuiti mitogenici e di sopravvivenza che regolano proliferazione e migrazione delle cellule epiteliali e stromali, nonché i programmi di risposta alla ferita. Questo asse è spesso studiato in contesti di segnalazione EGFR aberrante, inclusi la biologia tumorale, il rimodellamento infiammatorio e le risposte allo stress vascolare e cardiaco. Le dinamiche di espressione di HBEGF intersecano inoltre l’attività delle metalloproteasi ADAM e le reti paracrine/autocrine di fattori di crescita che modellano i microambienti tissutali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HB-EGF (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene HBEGF in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del HBEGF insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto HBEGF a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HB-EGF.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di HBEGF per lo studio della segnalazione di HB-EGF, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni HBEGF critici per la funzione di HB-EGF
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di HBEGF per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal HB-EGF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal HB-EGF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus HBEGF. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal HB-EGF Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR HB-EGF (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia HBEGF per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio HBEGF definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.