HADHB CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-433034

Übersicht

Das murine Gen **Hadhb** kodiert die Beta-Untereinheit des mitochondrialen trifunktionellen Proteins (HADHB), eines essenziellen Enzymkomplexes, der zentrale Schritte der β-Oxidation langkettiger Fettsäuren katalysiert, darunter Enoyl‑CoA‑Hydratase- und 3‑Hydroxyacyl‑CoA‑Dehydrogenase-Aktivitäten. Durch die Unterstützung des mitochondrialen Energiestoffwechsels trägt HADHB zur Aufrechterhaltung der Lipidhomöostase bei und beeinflusst zelluläre Reaktionen auf Nährstoffverfügbarkeit und metabolischen Stress. Störungen der mitochondrialen Fettsäureoxidation können das Redoxgleichgewicht und die ATP-Produktion beeinträchtigen, mit nachgelagerten Auswirkungen auf Gewebe mit hohem oxidativem Bedarf. Eine veränderte HADHB-Funktion ist daher relevant für Studien zu mitochondrialer Dysfunktion und lipidassoziierter Pathologie, einschließlich kardiometabolischer und neuromuskulärer Phänotypen, die in Mäusen modelliert werden.

Das HADHB CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Hadhb-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Hadhb-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Hadhb nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die HADHB-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Hadhb-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der HADHB-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Hadhb-Exone abzielen, die für die HADHB-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Hadhb-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom HADHB CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom HADHB CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Hadhb-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das HADHB HDR-Plasmid (m) und HADHB HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Hadhb-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Hadhb-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.