GW182 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400906

Panoramica

TNRC6A codifica GW182, un componente strutturale centrale del complesso di silenziamento indotto dai microRNA, che coordina la repressione genica post-trascrizionale. GW182 si lega alle proteine Argonaute e recluta i complessi deadenilasici CCR4–NOT e PAN2–PAN3, favorendo la deadenilazione dell’mRNA, la rimozione del cappuccio (decapping) e l’inibizione della traduzione all’interno dei P-bodies citoplasmatici. Attraverso queste interazioni, TNRC6A contribuisce a modellare programmi di espressione genica controllati dai microRNA che influenzano il controllo del ciclo cellulare, la differenziazione, le risposte allo stress e la segnalazione dell’immunità innata. La disregolazione delle reti di silenziamento associate a GW182 è stata collegata a un’anomala regolazione del trascrittoma osservata in molteplici contesti patologici, inclusi il cancro e i disturbi neurologici, rendendo TNRC6A un nodo utile per studi meccanicistici di biologia dell’RNA.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GW182 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TNRC6A in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TNRC6A insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TNRC6A a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GW182.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TNRC6A per lo studio della segnalazione di GW182, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TNRC6A critici per la funzione di GW182
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TNRC6A per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GW182 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GW182 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TNRC6A. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GW182 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GW182 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TNRC6A per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TNRC6A definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.