Plasmide CRISPR/Cas9 KO GRO1 (m): sc-420697
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- GRO1 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique GRO1, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: GRO1 Antibody (S-19): sc-80516
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO GRO1 (m) | sc-420697 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
La souris *Cxcl1* code GRO1, une chimiokine CXC sécrétée qui signale principalement via CXCR2 afin de favoriser la chimiotaxie et l’activation des neutrophiles et d’autres populations myéloïdes. GRO1 participe aux signalisations de l’immunité innée, amplifie les réseaux de cytokines inflammatoires et contribue à l’activation endothéliale ainsi qu’à l’extravasation des leucocytes via des voies associées à NF-κB et aux MAPK. Une expression dérégulée de CXCL1/GRO1 est associée à des lésions tissulaires inflammatoires, à une défense de l’hôte altérée et à des modifications du microenvironnement pertinentes pour l’infection et la biologie des cancers. Dans les systèmes expérimentaux, *Cxcl1* est largement utilisé pour étudier les gradients de chimiokines, le trafic leucocytaire et le remodelage induit par l’inflammation.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GRO1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Cxcl1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Cxcl1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Cxcl1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GRO1.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Cxcl1 pour l'étude de la signalisation de GRO1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Cxcl1 essentiels à la fonction de GRO1
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Cxcl1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le GRO1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le GRO1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Cxcl1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le GRO1 plasmide HDR (m) et le GRO1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Cxcl1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Cxcl1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.