GMF-β CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-425657

Übersicht

Der gliale Reifungsfaktor Beta (GMF-β), kodiert durch das Mausgen *Gmfb*-Gen, ist ein konservierter zytosolischer Regulator des Umbaus des Aktinzytoskeletts, der in neuronalen und immunbezogenen Kontexten Formveränderungen und die Motilität von Zellen beeinflusst. GMF-β interagiert mit dem Arp2/3-Komplex, um die Dynamik von Aktinverzweigungen zu modulieren, und ist damit an Signalwegen beteiligt, die Neuritenauswachsung, synaptisches Remodeling und Reaktionen von Gliazellen auf Umweltreize steuern. Im zentralen Nervensystem wurde GMF-β im Zusammenhang mit neuroinflammatorischer Signalübertragung und stressassoziierten Programmen der zellulären Aktivierung untersucht, bei denen eine veränderte Zytoskelettregulation die Gewebehomöostase beeinträchtigen kann. Fehlregulierte, mit GMF-β assoziierte Prozesse sind in experimentellen Modellen neurodegenerativer Erkrankungen und inflammatorischer Schädigung relevant, unter anderem durch Effekte auf Zellmigration, reaktive Gliose und zytoskelettabhängige Signalwege.

Das GMF-β CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Gmfb-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Gmfb-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Gmfb nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GMF-β-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Gmfb-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GMF-β-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Gmfb-Exone abzielen, die für die GMF-β-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Gmfb-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom GMF-β CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom GMF-β CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Gmfb-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GMF-β HDR-Plasmid (m) und GMF-β HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Gmfb-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Gmfb-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.