Plasmide CRISPR/Cas9 KO GGTase-IIβ (h): sc-406913

Présentation

RABGGTB code la sous-unité bêta de la géranylgéranyltransférase de Rab (GGTase‑IIβ), un composant central de l’enzyme hétérodimérique qui catalyse la géranylgéranylation des GTPases Rab. Cette modification lipidique est indispensable à l’association des Rab aux membranes et à leurs fonctions de trafic, qui régissent le bourgeonnement des vésicules, le tri endosomal, la dynamique membranaire liée à l’autophagie et la sécrétion régulée. En modulant les voies de transport dépendantes des Rab, GGTase‑IIβ influence l’identité des organites et la compartimentation des signaux au sein du système endomembranaire. Une dérégulation de la prénylation des Rab et du trafic vésiculaire a été associée à la neurodégénérescence, à des dysfonctionnements immunitaires et à des altérations du transport membranaire et du recyclage des récepteurs liées au cancer.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GGTase-IIβ (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RABGGTB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RABGGTB, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RABGGTB à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GGTase-IIβ.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RABGGTB pour l'étude de la signalisation de GGTase-IIβ, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RABGGTB essentiels à la fonction de GGTase-IIβ
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RABGGTB pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GGTase-IIβ plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GGTase-IIβ plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RABGGTB. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GGTase-IIβ plasmide HDR (h) et le GGTase-IIβ (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RABGGTB pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RABGGTB définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.