GFRα-3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405061

Panoramica

GFRA3 codifica il recettore umano alfa-3 della famiglia del fattore neurotrofico derivato da linee cellulari gliali (GDNF) (GFRα-3), un co-recettore ancorato tramite GPI che conferisce specificità di ligando per il fattore neurotrofico artemina e per ligandi correlati della famiglia GDNF. In seguito al legame con il ligando, GFRα-3 coopera con la tirosin-chinasi recettoriale RET per avviare cascate di segnalazione che includono MAPK/ERK e PI3K/AKT, le quali regolano la sopravvivenza neuronale, la differenziazione e la guida assonale. GFRA3 è ampiamente studiato nello sviluppo del sistema nervoso periferico e nelle interazioni neuro-immuni, dove un’alterazione della segnalazione recettore-ligando è stata collegata a meccanismi rilevanti per la funzione dei neuroni sensoriali e per l’elaborazione del dolore infiammatorio. Una segnalazione RET/famiglia GDNF disregolata che coinvolge GFRA3 è inoltre oggetto di studio in contesti legati alla segnalazione delle cellule tumorali, all’invasione e al dialogo con il microambiente in alcuni modelli di cancro selezionati.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GFRα-3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GFRA3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GFRA3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GFRA3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GFRα-3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GFRA3 per lo studio della segnalazione di GFRα-3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni GFRA3 critici per la funzione di GFRα-3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GFRA3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GFRα-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GFRα-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GFRA3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GFRα-3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GFRα-3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GFRA3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GFRA3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.