GADD 45γ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402483
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- GADD 45γ Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im GADD 45γ-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: GADD 45γ: sc-393261
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
GADD 45γ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) | sc-402483 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
GADD45G (GADD45γ) ist ein stressinduzierbares Mitglied der Familie der wachstumsarret- und DNA-schadensinduzierbaren Proteine (GADD45), das genotoxische und entzündliche Signale mit der Zellzykluskontrolle, der DNA-Reparatur und der Apoptose verknüpft. Es moduliert die MAPK-Signalübertragung, einschließlich der p38- und JNK-Signalwege, und ist in die Checkpoint-Regulation eingebunden, um einen G2/M-Arrest zu fördern und unter zellulärem Stress die genomische Stabilität aufrechtzuerhalten. In humanen Zellen wurde eine veränderte GADD45γ-Expression in verschiedenen Krankheitskontexten mit dysregulierter Proliferation, beeinträchtigten Stressantworten und aberranter Überlebenssignalgebung in Verbindung gebracht, was es zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien zur Stressadaptation macht. Seine Rolle bei der Integration von Umweltreizen in transkriptionelle Programme und Checkpoint-Programme unterstützt die Forschung zu DNA-Schadensantworten, Seneszenz und tumorsuppressorähnlichen Signalwegen.
Das GADD 45γ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des GADD45G-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des GADD45G-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von GADD45G nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GADD 45γ-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von GADD45G-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GADD 45γ-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf GADD45G-Exone abzielen, die für die GADD 45γ-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere GADD45G-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom GADD 45γ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom GADD 45γ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des GADD45G-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GADD 45γ HDR-Plasmid (h) und GADD 45γ HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von GADD45G-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten GADD45G-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.