FUCA2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405221

Panoramica

FUCA2 codifica l’alfa-L-fucosidasi 2, una glicosidasi secreta di tipo lisosomiale che idrolizza i residui terminali di fucosio da glicoconiugati e glicolipidi N- e O-legati, contribuendo al catabolismo e al rimodellamento dei glicani. Modulando lo stato di fucosilazione delle proteine di superficie cellulare e della matrice extracellulare, FUCA2 può influenzare processi quali il turnover dei recettori, l’adesione cellula–cellula e la segnalazione glicano-dipendente associata al sistema immunitario. Alterazioni del metabolismo del fucosio e dell’attività delle fucosidasi sono state collegate a cambiamenti nelle risposte infiammatorie e nei pattern di glicosilazione associati ai tumori, rendendo FUCA2 un nodo utile per interrogare fenotipi guidati dalla glicomica. Gli studi funzionali si concentrano comunemente su come la defucosilazione dipendente da FUCA2 influenzi il traffico intracellulare, la funzione lisosomiale e le vie di segnalazione mediate dalle glicoproteine.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FUCA2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene FUCA2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del FUCA2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto FUCA2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FUCA2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di FUCA2 per lo studio della segnalazione di FUCA2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni FUCA2 critici per la funzione di FUCA2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di FUCA2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal FUCA2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal FUCA2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus FUCA2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal FUCA2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR FUCA2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia FUCA2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio FUCA2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.