FTS Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420422

Panoramica

Aktip nel topo codifica la proteina FTS, un componente della macchina regolatoria dei telomeri che si associa ai fattori shelterin e contribuisce a mantenere l’integrità telomerica. FTS è stata collegata al controllo dell’accesso della telomerasi, all’omeostasi della lunghezza dei telomeri e alla protezione delle estremità cromosomiche, influenzando così la stabilità del genoma e la capacità proliferativa. Attraverso questi ruoli, Aktip/FTS si interseca con la risposta al danno del DNA e con la segnalazione dei checkpoint del ciclo cellulare, processi frequentemente alterati in fenotipi di instabilità cromosomica e in modelli rilevanti per il cancro. Analizzare la funzione di FTS è inoltre utile per studi sull’autorinnovamento delle cellule staminali, sullo stress replicativo e sulla disfunzione telomerica associata all’invecchiamento nei sistemi murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FTS (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Aktip in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Aktip insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Aktip a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FTS.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Aktip per lo studio della segnalazione di FTS, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Aktip critici per la funzione di FTS
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Aktip per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal FTS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal FTS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Aktip. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal FTS Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR FTS (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Aktip per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Aktip definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.