FTCD CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420419

Übersicht

Das murine Gen *Ftcd* kodiert die Formiminotransferase‑Cyclodeaminase (FTCD), ein bifunktionales zytosolisches Enzym, das aufeinanderfolgende Schritte im Histidinabbau katalysiert und den Ein‑Kohlenstoff‑Stoffwechsel mit folatabhängigen Signalwegen koppelt. Die FTCD‑Aktivität trägt zu den zellulären Pools von Tetrahydrofolat‑Derivaten bei, die die Nukleotidbiosynthese und Methylierungsreaktionen unterstützen, und verknüpft damit die Nutzung von Aminosäuren mit der metabolischen Homöostase. Eine veränderte FTCD‑Funktion ist mit angeborenen Stoffwechselstörungen assoziiert, die die Verarbeitung von Formiminoglutamat betreffen und darüber hinausgehende Störungen des Ein‑Kohlenstoff‑Flusses verursachen, was sie für Studien zu Stressantworten des Stoffwechsels relevant macht. *Ftcd* wird in Mausmodellen zudem als hepatozytenspezifischer Marker verwendet und unterstützt die Forschung zu Leberstoffwechsel und Differenzierungszustand.

Das FTCD CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ftcd-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ftcd-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ftcd nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die FTCD-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ftcd-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der FTCD-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Ftcd-Exone abzielen, die für die FTCD-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ftcd-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom FTCD CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom FTCD CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ftcd-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das FTCD HDR-Plasmid (m) und FTCD HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ftcd-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ftcd-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.