FTCD Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420419

Panoramica

Il gene murino **Ftcd** codifica la formiminotransferasi ciclo-deaminasi (FTCD), un enzima citosolico bifunzionale che catalizza passaggi sequenziali nel catabolismo dell’istidina e collega il metabolismo a un carbonio alle vie dipendenti dai folati. L’attività di FTCD contribuisce ai pool cellulari di derivati del tetraidrofolato che sostengono la biosintesi dei nucleotidi e le reazioni di metilazione, collegando l’utilizzo degli amminoacidi all’omeostasi metabolica. Alterazioni della funzione di FTCD sono associate a errori congeniti del metabolismo che compromettono la gestione del formiminoglutammato e causano perturbazioni più ampie del flusso a un carbonio, rendendola rilevante per studi sulle risposte allo stress metabolico. **Ftcd** è inoltre utilizzato come marcatore associato agli epatociti nei sistemi murini, a supporto della ricerca sul metabolismo epatico e sullo stato di differenziamento.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FTCD (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ftcd in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ftcd insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ftcd a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FTCD.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ftcd per lo studio della segnalazione di FTCD, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ftcd critici per la funzione di FTCD
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ftcd per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal FTCD CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal FTCD CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ftcd. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal FTCD Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR FTCD (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ftcd per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ftcd definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.