Fes CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403246

Übersicht

FES kodiert Fes, eine zytoplasmatische Tyrosinkinase ohne Rezeptorfunktion, die vor allem in hämatopoetischen und myeloischen Zelllinien exprimiert wird und dort Rezeptorsignale an nachgeschaltete Phosphorylierungskaskaden koppelt. Fes ist Teil von Signalnetzwerken, die Differenzierung, Zytoskelett-Umbau, Zelladhäsion und Funktionen der angeborenen Immunität regulieren und dabei Signale aus Zytokin- und Wachstumsfaktorwegen integrieren. Über seine SH2- und Kinase-Domänen moduliert Fes Substrate, die an der Aktindynamik und an Transkriptionsprogrammen beteiligt sind, welche die Leukozytenentwicklung und Entzündungsreaktionen prägen. Eine fehlregulierte FES-Signalgebung und -Expression wurde im Zusammenhang mit der Biologie hämatologischer Malignome sowie mit aberranter myeloischer Aktivierung untersucht, was FES zu einem relevanten Knotenpunkt für die Analyse kinasegetriebener Signalkreisläufe macht.

Das Fes CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des FES-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des FES-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von FES nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Fes-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von FES-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Fes-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf FES-Exone abzielen, die für die Fes-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere FES-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Fes CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Fes CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des FES-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Fes HDR-Plasmid (h) und Fes HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von FES-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten FES-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.