ERM Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-430518

Descripción general

Etv5 codifica el factor de transcripción ERM de la familia ETS, un regulador específico de secuencia de la expresión génica que integra señales de las vías MAPK/ERK y de los receptores tirosina quinasa para controlar la proliferación, la diferenciación y las decisiones de destino celular. En el desarrollo del ratón, ERM contribuye a la organogénesis y a la homeostasis tisular modulando programas transcripcionales vinculados al mantenimiento de células madre/progenitoras y al compromiso de linaje. La actividad de Etv5 se ha relacionado con vías que regulan la función de las células de Sertoli, la diferenciación neuronal y epitelial, y las respuestas adaptativas a la estimulación por factores de crecimiento. La señalización desregulada de factores ETS, incluidas las redes transcripcionales dependientes de ETV5/ERM alteradas, se estudia con frecuencia en modelos de tumorogénesis, invasión y fenotipos de resistencia, sin que ello implique resultados clínicos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ERM (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Etv5 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Etv5 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Etv5 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ERM.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Etv5 para la investigación de la señalización de ERM, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Etv5 críticos para la función de ERM
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Etv5 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ERM CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido ERM CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Etv5. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ERM (m) y el plásmido HDR ERM (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Etv5 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Etv5 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.