ERM Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-430518

Panoramica

Etv5 codifica il fattore di trascrizione ERM della famiglia ETS, un regolatore dell’espressione genica specifico di sequenza che integra segnali provenienti dalle vie MAPK/ERK e dai recettori tirosin-chinasici per controllare proliferazione, differenziamento e decisioni sul destino cellulare. Durante lo sviluppo del topo, ERM contribuisce all’organogenesi e all’omeostasi tissutale modulando programmi trascrizionali legati al mantenimento di cellule staminali/progenitrici e all’impegno di linea. L’attività di Etv5 è stata collegata a vie che regolano la funzione delle cellule del Sertoli, il differenziamento neuronale ed epiteliale e le risposte adattative alla stimolazione da fattori di crescita. Una segnalazione deregolata dei fattori ETS, incluse reti trascrizionali dipendenti da ETV5/ERM alterate, è frequentemente studiata in modelli di tumorigenesi, invasione e fenotipi di resistenza, senza implicare esiti clinici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ERM (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Etv5 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Etv5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Etv5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ERM.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Etv5 per lo studio della segnalazione di ERM, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Etv5 critici per la funzione di ERM
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Etv5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ERM CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ERM CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Etv5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ERM Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ERM (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Etv5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Etv5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.