Epac Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401807

Visão geral

RAPGEF3 codifica a Epac (proteína de troca diretamente ativada por cAMP), um fator de troca de nucleotídeos de guanina que conecta a sinalização por cAMP à ativação das pequenas GTPases Rap1 e Rap2. A Epac modula a transdução de sinais intracelulares em processos que incluem adesão celular, regulação da barreira endotelial, secreção e respostas dependentes de cálcio, por meio de vias dependentes de cAMP que se interligam com redes de sinalização de PKA, MAPK e integrinas. Em células humanas, a atividade de RAPGEF3/Epac influencia funções vasculares e de células imunes e tem sido estudada em contextos como regulação metabólica, sinalização inflamatória e fenótipos de migração celular associados a tumores. A dissecação da sinalização cAMP–Rap dependente de RAPGEF3 ajuda a esclarecer como a dinâmica de segundos mensageiros molda a remodelação do citoesqueleto e complexos de sinalização compartimentalizados.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Epac (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene RAPGEF3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do RAPGEF3, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do RAPGEF3 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Epac.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de RAPGEF3 para a investigação da sinalização de Epac, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) RAPGEF3 críticos para a função Epac
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos RAPGEF3 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Epac Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Epac Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus RAPGEF3. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Epac Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Epac (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia RAPGEF3 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo RAPGEF3 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.