eotaxin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422835
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- eotaxin Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im eotaxin-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: eotaxin: sc-373767
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
eotaxin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-422835 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Das murine Gen **Ccl11** kodiert **Eotaxin**, ein CC-Chemokin, das durch Bindung an **CCR3** die selektive Rekrutierung von Eosinophilen vermittelt und so den Leukozytenverkehr in entzündetem Gewebe prägt. Die Produktion von Eotaxin durch Epithelzellen, Fibroblasten und Immunzellen fördert Chemotaxis, Adhäsion und Gewebeinfiltration und ist in Zytokinnetzwerke wie die **IL‑4/IL‑13**-Signalgebung sowie nachgeschaltete, durch **MAPK** und **NF‑κB** regulierte Entzündungsprogramme eingebettet. **Ccl11** ist in Modellen der allergischen Atemwegsentzündung, der atopischen Dermatitis und der gastrointestinalen eosinophilen Entzündung breit untersucht, bei denen die Akkumulation von Eosinophilen zu Remodelling und Barrierefunktionsstörungen beiträgt. Über Allergien hinaus wurde eine veränderte **Ccl11/Eotaxin**-Signalgebung mit neuroimmuner Kommunikation und altersassoziierter Entzündung in Verbindung gebracht, was sie für systembiologische Untersuchungen chemokingetriebener Pathologie relevant macht.
Das eotaxin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ccl11-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ccl11-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ccl11 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die eotaxin-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ccl11-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der eotaxin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Ccl11-Exone abzielen, die für die eotaxin-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ccl11-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom eotaxin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom eotaxin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ccl11-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das eotaxin HDR-Plasmid (m) und eotaxin HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ccl11-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ccl11-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.