EMAP II CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420161

Übersicht

Aimp1 kodiert EMAP II (endothelial monocyte-activating polypeptide II), ein multifunktionales Protein, das vor allem als zytokinähnlicher Faktor bekannt ist, der aus der tRNA-Multisynthetase-Komplexkomponente AIMP1 hervorgeht. EMAP II ist an Stress- und Entzündungssignalwegen beteiligt und beeinflusst die Chemotaxis von Leukozyten, Endothelreaktionen sowie die übergeordnete Regulation angeborener Immunprozesse. In Mausmodellen wurde eine veränderte Aimp1/EMAP-II-Aktivität mit Signalwegen in Verbindung gebracht, die Apoptose, angiogeneseassoziierte Signalübertragung und Gewebeumbau steuern. Eine Fehlregulation dieser Prozesse ist relevant für Untersuchungen zu chronischen Entzündungen, zur Biologie des Tumor-Immun-Mikromilieus und zu Mechanismen vaskulärer Dysfunktion.

Das EMAP II CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Aimp1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Aimp1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Aimp1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die EMAP II-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Aimp1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der EMAP II-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Aimp1-Exone abzielen, die für die EMAP II-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Aimp1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom EMAP II CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom EMAP II CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Aimp1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das EMAP II HDR-Plasmid (m) und EMAP II HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Aimp1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Aimp1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.