Elk-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420156

Panoramica

Elk1 codifica Elk-1, un fattore di trascrizione con dominio ETS che funge da effettore nucleare della segnalazione MAPK/ERK. In seguito alla fosforilazione da parte delle chinasi ERK, JNK o p38, Elk-1 coopera con il serum response factor (SRF) sugli elementi di risposta al siero per regolare programmi genici di risposta immediata (immediate-early), come FOS e i membri della famiglia EGR. Questa attività collega segnali extracellulari a cambiamenti nella proliferazione, nella differenziazione, nella plasticità neuronale e nella trascrizione responsiva allo stress nelle cellule di topo. La trascrizione dipendente da Elk-1, quando deregolata, è stata studiata in contesti che coinvolgono una segnalazione mitogenica alterata, l’espressione genica associata all’infiammazione e vie rilevanti per la neurodegenerazione, rendendolo un nodo utile per l’interrogazione delle vie di segnalazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Elk-1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Elk1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Elk1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Elk1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Elk-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Elk1 per lo studio della segnalazione di Elk-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Elk1 critici per la funzione di Elk-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Elk1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Elk-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Elk-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Elk1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Elk-1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Elk-1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Elk1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Elk1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.