eIF4AII Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402758

Panoramica

EIF4A2 codifica per l’elicasi dell’RNA umana ATP-dipendente eIF4AII, un componente centrale del macchinario di inizio della traduzione eIF4F che rimodella la struttura secondaria della 5′ UTR per facilitare la scansione ribosomiale cap-dipendente. Controllando il reclutamento dell’mRNA e il riconoscimento del codone di inizio, eIF4AII influenza programmi di sintesi proteica globali e selettivi per specifici trascritti, associati a crescita cellulare, adattamento allo stress e differenziamento. La sua attività si intreccia con vie del metabolismo dell’RNA e con nodi di controllo della traduzione che integrano segnali a monte in grado di influenzare proliferazione e sopravvivenza. Una deregolazione dell’inizio della traduzione, inclusa un’alterata funzione della famiglia eIF4A, è spesso implicata nel rimodellamento oncogenico del proteoma e in altri disturbi legati a una regolazione anomala dell’mRNA.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO eIF4AII (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene EIF4A2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del EIF4A2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto EIF4A2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina eIF4AII.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di EIF4A2 per lo studio della segnalazione di eIF4AII, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni EIF4A2 critici per la funzione di eIF4AII
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di EIF4A2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal eIF4AII CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal eIF4AII CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus EIF4A2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal eIF4AII Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR eIF4AII (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia EIF4A2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio EIF4A2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.