Dnmt2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420034

Übersicht

Trdmt1 kodiert Dnmt2, eine hochkonservierte RNA-Cytosin-5-Methyltransferase, die überwiegend tRNAs modifiziert (insbesondere m5C an Cytosin 38) und dadurch tRNA-Stabilität, Dekodiergenauigkeit und zelluläre Stressantworten beeinflusst. Über die Regulation der RNA-Methylierung trägt Dnmt2 zur Kontrolle der Translation sowie zu umfassenderen epitranskriptomischen Netzwerken bei, die mit RNA-Prozessierung und Signalwegen der Genomstabilität verknüpft sind. Eine veränderte TRDMT1/DNMT2-Aktivität wurde mit gestörter Proteostase und beeinträchtigter Stressanpassung in Verbindung gebracht; in Modellsystemen wurde zudem eine Relevanz für onkogene Phänotypen und neurobiologische Prozesse beschrieben. In der Maus wird Trdmt1 häufig hinsichtlich seiner Rolle in der RNA-vermittelten Regulation der Genexpression, der zellulären Homöostase und kontextabhängiger Reaktionen auf Umwelt- und metabolische Stressoren untersucht.

Das Dnmt2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Trdmt1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Trdmt1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Trdmt1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Dnmt2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Trdmt1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Dnmt2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Trdmt1-Exone abzielen, die für die Dnmt2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Trdmt1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Dnmt2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Dnmt2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Trdmt1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Dnmt2 HDR-Plasmid (m) und Dnmt2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Trdmt1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Trdmt1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.