Plasmide CRISPR/Cas9 KO DLK2 (h): sc-406327

Présentation

DLK2 (delta-like non canonical Notch ligand 2) code une protéine transmembranaire présentant des répétitions de type EGF, qui agit comme un ligand/modulateur atypique de la signalisation Notch. Dans les cellules humaines, DLK2 peut influencer des programmes de communication intercellulaire qui régissent l’engagement de lignée, la différenciation et la mise en place des tissus, en recoupant des voies qui façonnent les états progéniteurs et les dynamiques épithélio-mésenchymateuses. Une expression altérée de DLK2 a été rapportée dans de multiples contextes tumoraux et modèles de biologie du développement, ce qui soutient l’étude de sa contribution au contrôle de la prolifération, aux phénotypes de type « cellules souches » et à la signalisation du microenvironnement. DLK2 est donc un outil utile pour disséquer la régulation non canonique de la voie Notch et les réponses transcriptionnelles en aval.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DLK2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DLK2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DLK2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DLK2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DLK2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DLK2 pour l'étude de la signalisation de DLK2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de DLK2 essentiels à la fonction de DLK2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DLK2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le DLK2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le DLK2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DLK2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le DLK2 plasmide HDR (h) et le DLK2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DLK2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DLK2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.